*，在液相色譜分析中，色譜柱良好的分離效率是成功分離的一個重要前提，若系統(tǒng)采用了不適當?shù)倪B接方式或者應(yīng)用不正確的毛細管，均可能導致產(chǎn)生不良的峰擴寬，色譜柱的*分離效率就更無從談起。甚至還可能發(fā)生使用的柱子越細，其洗脫峰的擴寬反而越大的情況。本文將詳細介紹毛細管對液相色譜分離的影響，以及如何選擇正確的毛細管與連接方式。

液相色譜柱良好的分離效率是色譜成功分離的一個重要前提，不適當?shù)墓苈愤B接或毛細管的使用不當，均可能導致不良的峰擴寬，因此需要特別注意。當使用4.6×250mm的“老式”標準分離柱時, 毛細管的作用和管路連接的影響還不是很突出；而當使用2.0×100mm的細徑色譜柱時，其對色譜分離的影響就很大。

對于“Ex-柱”而言，造成峰擴寬的主要原因在于管路連接中使用了錯誤的毛細管和空腔，它們會顯著地擴張淋洗通道。因此，在原則上應(yīng)該盡可能地采用窄小的柱徑，并適當?shù)乜s短連接管路。

如果用戶使用的是由同一制造商供應(yīng)的配套設(shè)備或緊密裝配型液相色譜儀，那么所有的管路連接已經(jīng)由供應(yīng)商預先優(yōu)化了。這類設(shè)備出現(xiàn)問題的情況僅在于：需要聯(lián)接另外一家公司的檢測器時，或者需要用不同的組件來自行組裝一套HPLC系統(tǒng)。

通過分離柱的峰寬度是與色譜柱的尺寸成正比的，簡而言之：細柱產(chǎn)生窄峰。液體輸導產(chǎn)生的峰擴寬則會牽涉到整個系統(tǒng)，因而需要對其逐一進行協(xié)調(diào)。

泊肅葉定律

法國物理學家吉恩·倫納德·泊肅葉對血液循環(huán)系統(tǒng)生理學的興趣促成了他在1840年對液體在細管中的流體行為進行了基礎(chǔ)性的實驗研究。在樣品和洗脫液之間不是形成一個直界面，而是層流的形式。

在直徑為“dt”的管子內(nèi)（液相色譜毛細管）流體的不同流速構(gòu)成一個“U”型（如圖2所示）。

為了盡量減少峰寬，應(yīng)選擇盡可能小的管道直徑。樣品分子有一種向流體邊界擴散的趨勢。假如沒有這個擴散，洗脫峰將是無限寬的，因為根據(jù)泊肅葉理論，流速在毛細管管壁處為零，因而樣品分子在這一點上將是極其緩慢地前行。而擴散的作用則導致了樣品分子由管壁遷移到管子中部，因而，樣品峰得以在有限的時間內(nèi)洗脫，并呈現(xiàn)有限的峰寬。

毛細管的優(yōu)化

液相色譜系統(tǒng)可以有多種不同的安裝方式，那么，我們是否應(yīng)該盡可能地縮短進樣器與色譜柱之間的連接？還是縮短色譜柱與檢測器之間的連接？或者兩者均可？這是不能隨意而為的，而且其應(yīng)用程式還不能隨意推廣到任何一個液相色譜系統(tǒng)。下面的實驗將為您清楚地演示毛細管對液相色譜系統(tǒng)的影響。

實驗裝置

帶有10μl樣品環(huán)的Rheodyne7125注射器，UV檢測器設(shè)在254nm，色譜柱4.6×100mm使用的是5-μ柱材料，流速為1ml/min以及8μl樣品檢測池，這些都是“標準”液相色譜的條件。如果使用0.13mm內(nèi)徑的毛細管，色譜柱和檢測器之間的連接長度則對系統(tǒng)的影響不大。只要將毛細管的直徑加倍（這里用到0.25mm），分離效率即隨連接長度的增加而顯著地降低（如圖3所示）。

小體積HPLC色譜柱

在使用細而短的色譜柱的情況下（例如2.0×100mm，流量200μl/min）,毛細管的影響甚至更具破壞性。若采用0.13mm內(nèi)徑的毛細管和80cm的連接長度，即可觀察到低于18％的峰展寬。如果使用0.25mm的毛細管，即使是5cm的短連接，分離效果則會明顯差了很多，而使用更長的毛細管則會導致分離毫無意義（如圖4所示）。

分離小體積樣品

在液相色譜系統(tǒng)中，應(yīng)用的液相色譜柱體積越小，毛細管的影響就越大。因此，在液相色譜系統(tǒng)中如果不對其他組件（特別是它們之間的連接）進行優(yōu)化，僅裝置一根微孔柱是沒有意義的。進樣器-色譜柱-樣品檢測池之間的線路連接對分離質(zhì)量具有特別的重要性。

小體積HPLC色譜柱

在使用細而短的色譜柱的情況下（例如2.0×100mm，流量200μl/min）,毛細管的影響甚至更具破壞性。若采用0.13mm內(nèi)徑的毛細管和80cm的連接長度，即可觀察到低于18％的峰展寬。如果使用0.25mm的毛細管，即使是5cm的短連接，分離效果則會明顯差了很多，而使用更長的毛細管則會導致分離毫無意義（如圖4所示）。

分離小體積樣品

在液相色譜系統(tǒng)中，應(yīng)用的液相色譜柱體積越小，毛細管的影響就越大。因此，在液相色譜系統(tǒng)中如果不對其他組件（特別是它們之間的連接）進行優(yōu)化，僅裝置一根微孔柱是沒有意義的。進樣器-色譜柱-樣品檢測池之間的線路連接對分離質(zhì)量具有特別的重要性。